荧光单分子计数链霉亲和素标记藻红蛋白【烟台科瑞斯】下

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发布时间: 2023/2/2 9:49:25
有 效 期: 长期有效
关 键 词: 链霉亲和素标记藻红蛋白,藻红蛋白,别藻蓝蛋白,荧光蛋白
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荧光单分子计数链霉亲和素标记藻红蛋白【烟台科瑞斯】下3.单分子细胞表面成像在培养的HEK293细胞上测试了进化保守且广泛表达的细胞表面蛋白β -连环蛋白(Beta-catenin),用于单分子成像。β-连环蛋白是粘附结的结构成分,也是Wnt信号转导通路的效应因子。用结合AlexaFluor594的抗兔抗体进行免疫荧光成像,证实β -catenin在表面表达(图S5)。由于β-连环蛋白高度表达,我们滴定抗-连环蛋白一抗抗体浓度低于标准免疫荧光方案。可以清楚地看到HEK293细胞膜上明显的SA-PE病灶(图5A)。选择单焦点并与高斯函数拟合,确定为单点源(图5B)。忽略一抗的对照实验仍然有可见和可量化的病灶,这表明细胞表面存在SA-PE的非特异性吸附。在10 ng mL?1的一抗和SA-PE存在的情况下,平均每100 μm2有3.8个病灶,单用SA-PE每100微米2有1.4个病灶(图 5c)。在不添加SA-PE的固定细胞上,每100μm 2仅能识别出0.1个病灶。当一抗浓度超过10 ng/ ml时, 可导致病灶荧光重叠和可分辨病灶减少。因此,我们检查带有0或10 ng /ml一抗的细胞的分布,并用高斯函数拟合扩展(图 5d)。在每 100μm有2~3个病灶2的区域内,两个种群有一定的重叠。因此,单个 细胞不能被准确地分配到任何一种情况,但群体水平的分析确实表明不同的分布。因此,SA-PE的单分子成像合于两个群体的半定量或二元分析。三、结论到目前为止,商用SA-PE已用于检测平均测量,如流式细胞术。本篇文章中表明SA-PE可以转化为数字检测的用途。为研究人员提供了一个更容易适应的单分子计数框架。基于生物素-链霉亲和素相互作用,提供了一个广泛的分析物检测“通用”平台。这种技术可以通过使用与检测抗体 (如抗FLAG)复合的其他藻胆蛋白来进一步复合。参考文献:Epifluorescent single-molecule counting with Streptavidin-Phycoerythrin conjugates.【联系方式】座机:0535-3800305手机:17362126717地址:山东省烟台市高新区科技大道39号邮箱:liuchuany网站:
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