植物细胞中的另一个重要组成部分是液泡。液泡是充满液体的囊泡,它们在细胞的中央位置,并且包含着大量的水分和离子。液泡对于细胞的形态、生长和发育都起着重要的作用,同时也在细胞内起着重要的储存作用。
植物细胞的另一个特点是它们具有叶绿体。叶绿体是进行光合作用的地方,亚细胞定位找哪里,它们含有绿色的叶绿素,可以帮助植物吸收太阳光能,并将其转化为化学能,为植物的生长和发育提供能量。
用水稻原生质体进行亚细胞定位时,亚细胞定位公司,为什么不拍摄叶绿体的自发荧光?
经测验,洋葱亚细胞定位公司,使用水稻黄化苗制备原生质体,载体转化效率及基因表达强度较高,而黄化苗中叶绿体较少,因此水稻原生质体定位拍照时,除非与叶绿体共定位,否则不拍摄叶绿体的自发荧光。
为什么要提供GFP空载的对照图片?
(1)作为整个实验过程中的操作参照,可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。
(2)作为载体体系的参照,亚细胞定位,确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。
亚细胞定位操作步骤
1、通过一些在线网站预测亚细胞定位
2、亚细胞定位载体构建
(1)引物设计:利用引物设计软件,根据pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因引物。
(2)载体构建:将PCR产物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS,得到表达目的基因与EGP融合蛋白质的真核表达载体。
3、细胞转染
当细胞生长到对数生长期时,接种到共聚焦显微镜的玻璃底培养皿(35mm petri dish,10 mm Microwell)中,培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时,将融合绿色荧光蛋白GFP的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。
4、激光扫描共聚焦显微镜观察
将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点,根据实验需求选择对应激发波长(常用405nm、488nm和561nm),使用共聚焦显微镜观察,采取图像。
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