（2）简易过1碘酸钠法% E0 O+ v: s2 T
本法是以NaIO４先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与Ig上的氨基相结合，所获酶标记抗1体的产率高，将近70％的HRP和Ig结合，99％的Ig与酶结合，酶与Ig的活性无重大损失，是目前最1常用的方法。7 p3 C# @， w9 L5 i% F% @7 r9 Z
1）原理：; h d) X' E' u _& O5 y
经典的过1碘酸钠法中需采用二1硝基氟本封闭HRP上残留的α-和ε氨基基以避免酶分子之间的交联。后来Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP，从而省去了二1硝基氟本封闭HRP步骤。HRP经NaIO4氧化后形成的醛化酶可与抗1体分子的氨基相连，形成斯夫氏硷，后者可进一步用NaBH4(或乙醇1胺)还原生成稳定的酶标记抗1体。
试剂的准备
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液、洗涤液应用pH计测量。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用，一般室温平衡不低于30min。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
加样
在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。
加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，鼠ELISA试剂盒价格，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样（一般不建议使用）。有些指标检测（如间接法ELISA）需用稀释的血1清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血1清标本，然后在微型震荡器上震荡1min。加酶结合物工作液和底物工作液时可用多道移液器，使加液过程在最1短时间内完成。
做好对照正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血1清、兔血1清或BSA等封闭。实验条件的选择在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:（1） 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯1乙烯、聚本乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚本乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
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